پایان نامه تخصصی (دکترا) رشته ژنتيك مولكولي، چکیده فارسی: سیستیک فیبروزیس (CF) یکی از شایع ترین بیماریهای اتوزومال مغلوب در سفیدپوستان ،با بروز 1 در 2500 است ودر اثر نقص در ژن CFTR ایجاد می شود که این ژن، کد کننده پروتئینی است که به عنوان یک کانال کلرید در غشائ سلول های اپیتلیال، لوله های ...
دسته بندی: علوم پایه » زیست شناسیتعداد مشاهده: 1358 مشاهده
فرمت فایل دانلودی:.zip
فرمت فایل اصلی: docx
تعداد صفحات: 250
حجم فایل:2,309 کیلوبایت
چکیده فارسی:
سیستیک فیبروزیس (CF) یکی از شایع ترین بیماریهای اتوزومال مغلوب در سفیدپوستان ،با بروز 1 در 2500 است ودر اثر نقص در ژن CFTR ایجاد می شود که این ژن، کد کننده پروتئینی است که به عنوان یک کانال کلرید در غشائ سلول های اپیتلیال، لوله های تنفسی، لوزالمعده، روده، غدد عرق و مجاری واز دفران واقع شده است. نقص در ژن CFTR باعث ایجاد غلظت غیر طبیعی کلرید در امتداد غشا سلول های اپیتلیال شده که منجر به بیماری ریوی پیشرونده،اختلال عملکرد پانکراس،افزایش کلریدعرق و ناباروری مردان می شود.در مطالعه حاضر فرکانس و ماهیت جهش ها و برخی از پلی مورفیسم ها ی ژن CFTR در مردان نابارور مبتلا به آزواسپرمی انسدادی ارزیابی شد.
در مجموع از 76 بیمار و 50 مرد بارور ،یک پانل از 5 جهش شایع در CFTR با استفاده از تکنیک PCR - ARMS غربالگری شد همچنین اگزونهای داغ از نظر جهش( 7،10،11،20،21،4) در ژن CFTR با استفاده از روش PCR - SSCP و در پی آن با توالی یابی غربالگری شدند. 18 بیماربا آزواسپرمی و CBAVD ، 53 بیمار مبتلا به آزواسپرمی بدون CAVD (Non-CAVD) و 5 بیمار مبتلا به آزواسپرمی و CUAVD بیماران مورد مطالعه مارا تشکیل می دادند. طول ناحیه پلی T (آللهای 5T،7T و 9T) واقع در splice-acceptor site اینترون 8/اگزون9 و پلی مورفیسم M470V واقع در اگزون 10 با استفاده از روش PCR-RFLP مشخص شد.
در 7 نفراز 18 بیمار مبتلا به CBAVD ، جهش CFTR یافت شد ، سه نفراز بیماران هرکدام دارای یک جهش ΔF508بودند. آلل5T در سه نفر از این بیماران یافت شد. در یک بیمار ، آلل 5T با جهشی غیر ازΔF508 همراه بود. در بیماران با CUAVD فقط یک جهش CFTR مشاهده شد. جهش های شایع CFTR در 9 نفر از 53بیمارمبتلا به Non-CAVD ، یافت شد و پنج نفر ازاین بیماران دارای یک جهش ΔF508بودند. آلل5T در پنج مورد از این بیماران یافت شد. در دو بیمار ، آللT5 با ΔF508 همراه نبود و در هشت بیمار حامل آلل 5T هیچیک از جهش های شایع یافت نشدند . در بیماران مبتلا به CBAVD ، Non-CAVD و CUAVD فراوانی آلل5Tبه ترتیب22 ٪ ،14 ٪ (معنی دار نسبت به گروه کنترل)و10 ٪ (غیر معنی دار نسبت به گروه کنترل) بدست آمد.
جهش آلل5Tبا طیف وسیعی از تظاهرات بالینی و فرکانس بالا در بیماران CBAVD مشاهده شد.
ژنوتیپ 5T/M470 به ترتیب در 3 ، 5 و 1 نفرو ژنوتیپ 5T/V470 . به ترتیب در 0،1 و 0 نفرو 5T همراه با فرم هتروزیگوت M470V به ترتیب در 5،8و0 نفراز بیماران CBAVD ، غیر CAVD و CUAVDیافت شد.
مشاهدات ما نشان داد که ژن CFTR در روند اسپرماتوژنز و یا در آسیب شناسی دستگاه تناسلی نقش دارد.
در بیماران بر خلاف گروه کنترل فرکانس آلل M470بالاتر از آللV470 بود واین نشان می دهد که آلل M470 با نقص پروتئین CFTRمرتبط است.
اگر مرد مبتلا به CBAVD ، Non-CAVD و CUAVD باشد حتی با وجود سابقه خانوادگی منفی. از نظر CF غربالگری جهش CFTR قبل از درمان ناباروری ضروری خواهد بود
کلمات کلیدی:جهش CFTR ، CBAVD ، آزواسپرمی انسدادی ، تکنیک PCR-ARMS-
فهرست مطالب:
چکیده فارسی
فصل اول
1-1 . مقدمه
1- 2. ناباروری
1-2-1 . ناباروری در مردان
1-2-1-1 . عوامل مؤثر در ناباروري مردان
1-2-1-1-1. اختلالات ژنتيكي
1-2-1-1-1-1.كروموزوم Y
1-2-1-1-1-1-1. بازوي كوتاه كروموزوم Y (YP)
1-2-1-1-1-1-2. بازوي بلند كروموزوم Y (Yq)
1-2-1-1-2. انواع ناهنجاري‌هاي اسپرمي در مردان نابارور
1-2-1-1-2-1.انواع آزوسپرمی
1-3 . ژن CFTR
1-3-1 . ساختار پروتئین CFTR
1-3-2 . عملکرد پروتئین CFTR
1-3-3 . ارتباط جهش ژن CFTR وبیماری
1-3-4 . ساختار ژن CFTR
1-3-5. ساختار mRNAاي ژن CFTR
1-4 . سیستیک فیبروزیس(فیبروز کیستیک)
1-5. تشخیص پیش از تولد
1-6.ضرورت انجام تحقيق
1-7.اهداف تحقيق
1-8.سؤالات و فرضیه ها
فصل دوم
2-1.تاریخچه ومروری بر مطالعات گذشته
2-2. تاثير پلی مورفیسم هاي ژن CFTR
2-3.ارتباط جهش در ژن CFTRوآزواسپرمی
فصل سوم
3-1.نمونه گيري
3-1-1.نمونه هاي خوني
3-2.استخراج DNAاز نمونه هاي خون
3-3.تعيين غلظت DNA
3-3-1. مراحل انجام روش اسپکتروفتومتري
3-3-2. بررسي کيفي DNA استخراج شده به روش الکتروفرز روي ژل آگارز
3-4. واکنش های زنجیره ای پلی مرازی(PCR)
3-4-1. مواد اوليه واكنش PCR
3-4-2. سيكلهايPCR
3-4-3.روش انجام PCR
3-5.مواد و محلولهای مورد نیاز برای الكترو فورز ژل آگارز
3-6.تهيه ژل آگارز5/1%
3-7. الکتروفرز محصولات PCR بر روي ژل پلي اکريل آميد
3-7-1.مواد و محلول های مورد نیاز برای تهیه ژل پلی اکریل آمید
3-7-2. تهيه ژل پلي اكريل
3-7-3.PCR-RFLP
3-7-4.تهيه ژل SSCP
3-8. رنگ آميزي ژل پلي آکريل آميد به روش نيترات نقره
3-8-1. مواد و محلول هاي مورد نياز براي رنگ آميزي نیترات نقره
3-8-2.روش انجام رنگ آميزي نيترات نقره
3-9.انجام SSCP
3-10.طراحی پرایمر
3-11.نحوه آماده سازي پرایمرها
3-12 PCR-RFLP.
3-12-1.انجام PCR-RFLP
3-13. ARMS-PCR..
3-14.توالی یابیDNA(DNA Sequencing)
سیستیک فیبروزیس (CF) یکی از شایع ترین بیماریهای اتوزومال مغلوب در سفیدپوستان ،با بروز 1 در 2500 است ودر اثر نقص در ژن CFTR ایجاد می شود که این ژن، کد کننده پروتئینی است که به عنوان یک کانال کلرید در غشائ سلول های اپیتلیال، لوله های تنفسی، لوزالمعده، روده، غدد عرق و مجاری واز دفران واقع شده است. نقص در ژن CFTR باعث ایجاد غلظت غیر طبیعی کلرید در امتداد غشا سلول های اپیتلیال شده که منجر به بیماری ریوی پیشرونده،اختلال عملکرد پانکراس،افزایش کلریدعرق و ناباروری مردان می شود.در مطالعه حاضر فرکانس و ماهیت جهش ها و برخی از پلی مورفیسم ها ی ژن CFTR در مردان نابارور مبتلا به آزواسپرمی انسدادی ارزیابی شد.
در مجموع از 76 بیمار و 50 مرد بارور ،یک پانل از 5 جهش شایع در CFTR با استفاده از تکنیک PCR - ARMS غربالگری شد همچنین اگزونهای داغ از نظر جهش( 7،10،11،20،21،4) در ژن CFTR با استفاده از روش PCR - SSCP و در پی آن با توالی یابی غربالگری شدند. 18 بیماربا آزواسپرمی و CBAVD ، 53 بیمار مبتلا به آزواسپرمی بدون CAVD (Non-CAVD) و 5 بیمار مبتلا به آزواسپرمی و CUAVD بیماران مورد مطالعه مارا تشکیل می دادند. طول ناحیه پلی T (آللهای 5T،7T و 9T) واقع در splice-acceptor site اینترون 8/اگزون9 و پلی مورفیسم M470V واقع در اگزون 10 با استفاده از روش PCR-RFLP مشخص شد.
در 7 نفراز 18 بیمار مبتلا به CBAVD ، جهش CFTR یافت شد ، سه نفراز بیماران هرکدام دارای یک جهش ΔF508بودند. آلل5T در سه نفر از این بیماران یافت شد. در یک بیمار ، آلل 5T با جهشی غیر ازΔF508 همراه بود. در بیماران با CUAVD فقط یک جهش CFTR مشاهده شد. جهش های شایع CFTR در 9 نفر از 53بیمارمبتلا به Non-CAVD ، یافت شد و پنج نفر ازاین بیماران دارای یک جهش ΔF508بودند. آلل5T در پنج مورد از این بیماران یافت شد. در دو بیمار ، آللT5 با ΔF508 همراه نبود و در هشت بیمار حامل آلل 5T هیچیک از جهش های شایع یافت نشدند . در بیماران مبتلا به CBAVD ، Non-CAVD و CUAVD فراوانی آلل5Tبه ترتیب22 ٪ ،14 ٪ (معنی دار نسبت به گروه کنترل)و10 ٪ (غیر معنی دار نسبت به گروه کنترل) بدست آمد.
جهش آلل5Tبا طیف وسیعی از تظاهرات بالینی و فرکانس بالا در بیماران CBAVD مشاهده شد.
ژنوتیپ 5T/M470 به ترتیب در 3 ، 5 و 1 نفرو ژنوتیپ 5T/V470 . به ترتیب در 0،1 و 0 نفرو 5T همراه با فرم هتروزیگوت M470V به ترتیب در 5،8و0 نفراز بیماران CBAVD ، غیر CAVD و CUAVDیافت شد.
مشاهدات ما نشان داد که ژن CFTR در روند اسپرماتوژنز و یا در آسیب شناسی دستگاه تناسلی نقش دارد.
در بیماران بر خلاف گروه کنترل فرکانس آلل M470بالاتر از آللV470 بود واین نشان می دهد که آلل M470 با نقص پروتئین CFTRمرتبط است.
اگر مرد مبتلا به CBAVD ، Non-CAVD و CUAVD باشد حتی با وجود سابقه خانوادگی منفی. از نظر CF غربالگری جهش CFTR قبل از درمان ناباروری ضروری خواهد بود
کلمات کلیدی:جهش CFTR ، CBAVD ، آزواسپرمی انسدادی ، تکنیک PCR-ARMS-
فهرست مطالب:
چکیده فارسی
فصل اول
1-1 . مقدمه
1- 2. ناباروری
1-2-1 . ناباروری در مردان
1-2-1-1 . عوامل مؤثر در ناباروري مردان
1-2-1-1-1. اختلالات ژنتيكي
1-2-1-1-1-1.كروموزوم Y
1-2-1-1-1-1-1. بازوي كوتاه كروموزوم Y (YP)
1-2-1-1-1-1-2. بازوي بلند كروموزوم Y (Yq)
1-2-1-1-2. انواع ناهنجاري‌هاي اسپرمي در مردان نابارور
1-2-1-1-2-1.انواع آزوسپرمی
1-3 . ژن CFTR
1-3-1 . ساختار پروتئین CFTR
1-3-2 . عملکرد پروتئین CFTR
1-3-3 . ارتباط جهش ژن CFTR وبیماری
1-3-4 . ساختار ژن CFTR
1-3-5. ساختار mRNAاي ژن CFTR
1-4 . سیستیک فیبروزیس(فیبروز کیستیک)
1-5. تشخیص پیش از تولد
1-6.ضرورت انجام تحقيق
1-7.اهداف تحقيق
1-8.سؤالات و فرضیه ها
فصل دوم
2-1.تاریخچه ومروری بر مطالعات گذشته
2-2. تاثير پلی مورفیسم هاي ژن CFTR
2-3.ارتباط جهش در ژن CFTRوآزواسپرمی
فصل سوم
3-1.نمونه گيري
3-1-1.نمونه هاي خوني
3-2.استخراج DNAاز نمونه هاي خون
3-3.تعيين غلظت DNA
3-3-1. مراحل انجام روش اسپکتروفتومتري
3-3-2. بررسي کيفي DNA استخراج شده به روش الکتروفرز روي ژل آگارز
3-4. واکنش های زنجیره ای پلی مرازی(PCR)
3-4-1. مواد اوليه واكنش PCR
3-4-2. سيكلهايPCR
3-4-3.روش انجام PCR
3-5.مواد و محلولهای مورد نیاز برای الكترو فورز ژل آگارز
3-6.تهيه ژل آگارز5/1%
3-7. الکتروفرز محصولات PCR بر روي ژل پلي اکريل آميد
3-7-1.مواد و محلول های مورد نیاز برای تهیه ژل پلی اکریل آمید
3-7-2. تهيه ژل پلي اكريل
3-7-3.PCR-RFLP
3-7-4.تهيه ژل SSCP
3-8. رنگ آميزي ژل پلي آکريل آميد به روش نيترات نقره
3-8-1. مواد و محلول هاي مورد نياز براي رنگ آميزي نیترات نقره
3-8-2.روش انجام رنگ آميزي نيترات نقره
3-9.انجام SSCP
3-10.طراحی پرایمر
3-11.نحوه آماده سازي پرایمرها
3-12 PCR-RFLP.
3-12-1.انجام PCR-RFLP
3-13. ARMS-PCR..
3-14.توالی یابیDNA(DNA Sequencing)
دانلود بازی استراتژیک ساحل بوم Android Boom Beach 37.76 – اندرویدعنوانم
آزمون های تاپ ناچ top notch complete assessment test
دانلود گلچین نوحه و مداحی محرم با نوای سیدمهدی میرداماد
مدل دکوراسیون دیوار پشت تلوزیون شیک و زیبا
کامل ترین مجموعه آموزش زبان انگلیسی English Today - جدید و کامل - اورجینال
آموزش زبان هندی به شیوه کانون زبان ایران - جدید و دارای گارانتی - اورجینال
آموزش زبان ژاپنی رزتا استون - جدید و دارای گارانتی